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《中國藥典》2000版附錄無菌檢查法規定無菌檢查需氣菌、厭氣菌培養基管置30～50℃、真菌培養基管置20～25℃培養7日。

《中國藥典》2005版附錄無菌檢查法之后才開始延長至14天，因為大多數的細菌經過7天的培養都可以生長出來，這個對于本身允許少量菌落存在的非無菌藥物已經足夠了，但是對于要求嚴格無菌的藥物，還要考慮到可能有極少數的細菌或者真菌，以及霉菌孢子生長速度比較慢，在7天時還未生長，所以要延長培養時間，以同樣條件或者變換為霉菌培養的溫濕度條件，再培養7天，以便給可能存在的污染菌一個足夠的生長時間。

的確有些菌在培養7天時觀察不到長菌現象，但在14天培養后才發現了菌落，如結核桿菌，與其它常見的細菌比較，結核桿菌的生長代謝緩慢，并且在自然環境不利的情況下，結核桿菌具有很強的生存能力：常見的細菌一般10-30分種就能繁殖一代，而結核桿菌則需要12-24小時才能繁殖—代，由此可見結核桿菌的生長代謝比潰兇的細菌緩慢的多。

它屬于放線菌目分支桿菌科分支桿菌屬，為專性需氧菌，營養要求高，在含有蛋黃、馬鈴薯、甘油和天門冬素等的固體培養基上才能生長。最適ph6.5～6.8，最適溫度為37℃，生長緩慢，接種后培養3～4周才出現肉眼可見的菌落；抗結核治療后菌活力衰退，培養時需6--8周甚至20周后才出現菌落。

另外布魯氏菌為胞內寄生菌，專性需氧，營養要求高，多數菌株培養時需要多種氨基酸、硫胺素、煙酸和生物素等，可在普通培養基中加入血清或肝滲液進行培養。

初次分離需5%-10%的CO2，生長緩慢，培養2-3天出現菌落，4-5天后菌落直徑可達2-3mm，菌落無色、半透明、表面光滑、無溶血，革蘭染色為革蘭陰性球桿菌，革蘭染色時堿性復紅著色弱，可延長染色時間至3分鐘，鏡下菌體較小，呈細沙狀，偶見集聚成小團。觸酶陽性，氧化酶陽性，脲酶快速陽性。

有文獻報道使用全自動血培養系統陽性率40-70%，平均培養時間5.7d（3-12d）[1]，并且生長曲線平緩。布魯菌在自然環境中抵抗力很強，在干燥土壤中可生存數月，在皮毛中、乳及乳制品、凍肉中時間生存較長，對常用的物理消毒方法和化學消毒劑敏感，加熱60℃或陽光下暴曬10～20min可殺死該菌，5％的石灰水、2％的來蘇兒、0.2％的漂白粉均可以在數分鐘內將該菌殺死。說明培養周期的延長對于無菌藥物中的菌檢還是很有必要的。

培養及觀察：《中國藥典》2015版四部通則1101無菌檢查法規定接種供試品后的培養基容器分別按各培養基規定的溫度培養14天；接種生物制品供試品的硫乙醇酸鹽流體培養基的容器應分成兩等份，一份置30?35℃培養，一份置20?25℃培養。培養期間應逐日觀察并記錄是否有菌生長。

如在加入供試品后或在培養過程中，培養基出現渾濁，培養14天后，不能從外觀上判斷有無微生物生長，可取該培養液適量轉種至同種新鮮培養基中，培養3天，觀察接種的同種新鮮培養基是否再出現渾濁。

《中國藥典》2020版四部通則1101無菌檢查法規定接種供試品后的培養基容器分別按各培養基規定的溫度培養不少于14天；接種生物制品供試品的硫乙醇酸鹽流體培養基的容器應分成兩等份，一份置30?35℃培養，一份置20?25℃培養。培養期間應定期觀察并記錄是否有菌生長。如在加入供試品后或在培養過程中，培養基出現渾濁，培養14天后，不能從外觀上判斷有無微生物生長，可取該培養液適量轉種至同種新鮮培養基中，再培養不少于4天，觀察接種的同種新鮮培養基是否再出現渾濁。

注：文章參考：[1]賈斌，張峰波，等.血液檢出布魯氏菌陽性患者的實驗室及臨床特點分析[J].新疆醫科大學學報，2017，40（2）：136-140.；文章參考來源百度百科；《中國藥典》2015版附錄無菌檢查法；《中國藥典》2020版附錄無菌檢查法。

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